Protocollen voor Hoechst kleuring

Protocollen voor Hoechst kleuring

De Hoechst vlekken fluorescente kleurstoffen gebruikt voor het labelen van DNA en RNA door fluorescentie microscopie en flowcytometrie technieken. Hoechst 33258 en Hoechst 33342 zijn de meest gebruikte van deze vlekken. Zij hebben het vermogen om te binden aan DNA-moleculen, waardoor de kernen en mitochondriën fluorescerend onder ultraviolet licht weergegeven. Protocollen voor Hoechst vlekken zijn gangbare praktijk in de biotechnologische en genetica laboratoria, en omvatten celkleuring technieken met behulp van zowel Hoechst 33258 en Hoechst 33342.

Hoechst 33342 HSC kleuring en Stem Cell Zuivering Protocol

Dit protocol wordt gebruikt om cellen van muizen beenmerg vlekken. Technici bereiden beenmerg monster met HBSS + zoutoplossing, HEPES buffer en foetaal kalf serum. Ze draaien de oplossing en voeg een voorverwarmde DMEM medium. Hoechst vlek wordt toegevoegd. De oplossing wordt in een 98,6 graden Fahrenheit waterbad gedurende precies 90 minuten, meldt de afdeling Immunologie aan de Universiteit van Pittsburgh. DNA-segmenten verschijnen fluorescerend onder een cytometer.

Hoechst 33342 DNA kleuring

Tijdens dit protocol, technici gesuspendeerd Hoechst 33342 vlek in gedestilleerd water, voeg 2 procent foetaal kalfsserum het celmonster, waarbij de pH op 7,2 met behulp van een bufferoplossing. De cellen worden vervolgens geïncubeerd bij 98,6 ° C gedurende een uur, en onmiddellijk geanalyseerd met een apparaat genaamd cytometer.

Stained DNA is dan zichtbaar en fluorescerend, volgens de Universiteit van Michigan Health System.

DNA Detection De DNA-bindende fluorochroom Hoechst 33258

Deze protocollen die een apparaat genaamd spectrofotometer aan DNA en RNA-segmenten analyseren. Technici gebruiken Hoechst 33258 werkende oplossing en kalf thymus DNA-monsters. In die afgescheiden oplossing met het DNA monster en een chemische stof ethidium bromide maken ook. Later, ze de cel kleuring resultaten te vergelijken, zowel in de media, met behulp van een spectrofotometer, volgens Current Protocols in Cytometry.